1、蛋白质在洗脱时，当出现第一个洗脱峰后，洗脱液已经接近柱床表面，没有及时加入洗脱液曹成蛋白被洗脱下来的较少；2、在补加洗脱液时，大量蛋白又继续被洗脱下来；3、在层析柱发生倾斜、移动时，会出现双峰；4、在把样品的顺序搞错时会出现双峰。
